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T7 RNA转录地高辛标记试剂盒图片
产品货号:
BTN220896
中文名称:
T7 RNA转录地高辛标记试剂盒
英文名称:
T7 RNA Transcription DIG Labeling Kit
产品规格:
20T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是基于T7 RNA聚合酶体外转录原理的标记试剂盒,得到的DIG标记的RNA探针可以用于分子杂交等实验。




利用含有T7启动子的模版DNA,以含DIG-UTP的NTP为底物,从T7启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的、DIG标记的RNA探针。


T7 RNA转录地高辛标记试剂盒



  • 即开即用,用户只需提供含T7启动子的DNA模板即可以进行体外转录标记实验,不需要单独准备每一个成份。
  • 单溶液预配液,减少加样次数,避免了操作误差,增加了可重复性。
  • 模版DNA可以是线性化的质粒DNA,也可以是PCR扩增产物。
  • 可以合成的DIG标记的RNA的最佳长度在20nt到2000nt之间。
  • 产品配方经过精心优化,每μg DNA模版可以合成2μg DIG标记的RNA。
  • 本试剂盒足够20次20μL体系的体外转录实验,并且只能用于科研。



组分规格
2×T7转录标记预配液(含DIG-UTP)0.2mL
T7 RNA聚合酶-RI混合液20μL
RNase-free水1mL

保存:-20℃,有效期1年。


Tris饱和酚、氯仿、RNase-free75%乙醇、RNase-free的塑料离心管、EDTA溶液、单链RNA定量试剂盒


一、制备DNA模板
本试剂盒不含所需试剂,此处信息仅供参考。PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录标记的模板,但是必须注意以下几点。
  • 是必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA,则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
  • 是需要转录的DNA序列的上游必须有T7启动子。如果模板是PCR产物,则可以在设计引物时将T7启动子序列(5'TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3')加上。如果是将DNA片段克隆到载体上,则需要选择有T7启动子的载体,并且克隆位点必须位于T7启动子下游。
  • 是需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3'突出。如果是3'突出(比如选择了Pst I来线性化质粒),则最好用T4 DNA聚合酶修平。
  • 是必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A,因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染,所以在用作模板前,最好采取胶回收的方法回收质粒DNA,并且加入少量总RNA一起保温,然后电泳检测RNA是否被降解,以此来判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。如果有RNase污染,则必须使用酚-氯仿抽提法反复去除残留的RNase,然后再乙醇沉淀质粒DNA。


二、体外转录标记反应
  • 如果有N个样品,强烈建议做一个阴性对照,故共设置N+1个反应,这样一起并排电泳时容易判断哪个条带是模板DNA,哪个条带是扩增得到的标记RNA。在N+1个RNase-free的塑料离心管中,在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分(T7转录标记预配液容易产生结晶沉淀,一定要握在手中直到结晶彻底溶解并摇匀后方可使用):
    成分N个样品管阴性对照管
    DNA模板50ng左右的PCR片段
    或1μg左右的线状质粒
    不加
    2×T7转录标记预配液
    (含DIG-UTP)
    各10μL10μL
    T7 RNA聚合酶-RI混合液各1μL1μL
    RNase-free水到20μL20μL
    • 此为20μL反应体系的用量,对其他反应体系,各成分的用量可以按比例增减。本制品的T7转录标记预配液已经含有NTP和DIG-UTP。
  • 37℃保温1~2小时,再42℃保温1~2小时。
  • 加入2μL自备的500mM的EDTA溶液灭活T7 RNA聚合酶。
  • 取1~3μL电泳,此时最好用DNA模板做电泳对照。电泳时比阴性对照多出的条带就是扩增得到的标记RNA(由于合成的标记RNA长度不均匀,即使长度均匀,但由于自生形成发夹结构,泳动速度也不一致,所以电泳所得标记RNA条带一般都不是清晰,而是比较弥散的电泳条带。但由于标记RNA是单链,分子量比同样长度的DNA小一倍,因此标记RNA一般比其双链DNA模板电泳速度更快。
  • 定量,可以用自备的单链RNA定量试剂盒检测浓度。不推荐使用电泳定量。使用本试剂盒时1μg DNA模板一般可以合成2μg的标记RNA。
  • 得到的标记RNA可以放-80℃保存也可以直接用于分子杂交。杂交时双链的模板DNA并不会干扰杂交,故可以不去除。

相关搜索:T7 RNA转录地高辛标记试剂盒RNA探针标记地高辛标记RNAT7转录T7 RNA Transcription DIG Labeling Kit
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